苏木精和伊红（
hematoxylin eosin stain
，
HE
）染色的原理是组织和染料之间的化学结合。苏木精是一种碱性染料，在酸性性（亲碱性）结构上形成蓝紫色，主要是那些含有核酸分子的结构，如染色质、核糖体和富含
RNA
的细胞质区域；伊红是一种酸性染料，将碱性（亲酸性）着色，会将红细胞、细胞质、肌肉和胶原蛋白（细胞质中大部分蛋白质是碱性的）等基本元素染成不同强度的粉红色、橙色和红色。
苏木精
-
伊红
(H&E)
染色是组织病理学中应用最广泛的染色技术。顾名思义，
H&E
染色使用两种染料的组合，即苏木精和伊红。这种组合能够将染色各种组织元素根据酸碱性区分开，主要是含有核酸区域（主要是细胞核
-
苏木精
）和不含核酸区域（主要是细胞质
-
伊红
），使它们易于观察。
苏木精
是从原木树的心材中提取的
Hematoxylum campechianum
，当氧化时，它会形成
Hematein
，这是一种与某些金属离子形成强烈着色络合物的化合物，主要是铁（
Fe
）和铝（
Al
）盐，金属
-
血红素络合物用于在显微镜下检查之前对细胞核进行染色。
将
1.0
克苏木精溶于
10
毫升乙醇
(95%)
中，用杵在研钵中溶解，将
20
克铵或钾明矾溶于
200
毫升温热的蒸馏水中。然后将上述两种物质混合在一起并迅速加热直至煮沸。且不断搅拌，然后再加入
0.5
克氧化汞。停止加热，并尽快使用自来水冷却。过滤上述混合物并储存在一个棕色或瓶子。染色剂在室温
(20°C - 30°C)
下稳定保存数月。
将
1.0
克黄伊红（
Yellow eosin
）溶解于约
80
毫升蒸馏水中。在此基础上加入
320 ml 95% (v/v)
乙醇，然后加入
0.4 ml
冰醋酸，拌匀即可。本溶液在室温
(20°C - 30°C)
下稳定保存数月。
苏木精
-
伊红染色的材料来自于上期推文包埋并切片的组织，不懂的回去读上一篇推文
（
1
）脱蜡：二甲苯两次，每次
5min
（可延长至
10-15 min
）。使石蜡溶出，保留组织片。
（
2
）复水（除脂肪外，让其余物质恢复到原始状态）：分别过
100%
（
I
）、
100%
（
II
）、
90%
、
80%
、
70%
酒精各
5min
。蒸馏水（或
PBS
）两次各
5min
。
（
3
）苏木精染色，
2~5min
（苏木精染色时间长一点没有关系），水洗（蒸馏水或自来水），去除多余苏木精（建议一边染色以便观察，染色
OK
即可停止染色）。
（
4
）分化：
5%
冰醋酸溶液，浸泡
30s
左右，使苏木精浮色褪去，避免非特异性着色。
（
5
）返蓝，为苏木精提供弱碱性环境（自己配
HCO32+
等弱碱性水或者自来水），使苏木精显蓝黑色，自来水洗约
15min
。
（
6
）伊红染色
2-10s
不要过染（伊红绝对不能过染，配置的时间越长染色时间就越短），充分水洗去除浮色（建议一边染色以便观察，染色
OK
即可停止染色）。
苏木精对核酸着色，酸性条件显红色，碱性条件显蓝色。
（
7
）脱水（利于片子保存），分别过
70%
、
80%
、
90%
、
100%
酒精各
10s
。转移至干净的二甲苯当中浸泡
1min
。
（
8
）封片，封片是用吸水纸擦去组织块以外多余的二甲苯（从二甲苯中拿出要迅速操作，否则组织会氧化变黑），滴加中性树胶（将
20
μ
L
的枪头剪一段，让中性树脂更容易被吸取），加盖玻片，用镊子轻轻按压，是树胶迅速扩散覆盖组织。动作要迅速，防止干片。
（
9
）封片后，玻片水平放置，待树胶完全干燥后，收存。
H&E
与凋亡：
凋亡迹象，核固缩和核分裂，染色质凝结，嗜碱性增高，膜起泡，细胞核深染，细胞形状拉长，空间变细，细胞间相互作用中断。
（图1 H&E细胞凋亡解读 [1]）
H&E与炎症：组织中的炎症主要是看白细胞着色，一般白细胞会成团具体呈现粉红色。
（图2 白细胞浸润(infiltration)呈现聚集的粉红色 [2]）
H&E与睾丸组织细胞类型：曲细精管中主要有支持细胞，生殖类细胞，管周肌样细胞组成。
（图3 曲细精管细胞类型判断）
Spermatid: spermatid is a haploid male sexual cell formed after meiosis from spermatocytes that eventually matures into a spermatozoon.
Spermatozoa: the spermatozoa have a head, neck, middle section, and tail. The plasma membrane surrounds the whole sperm body.
[1] Modulated Electro-Hyperthermia Supports the Effect of Gemcitabine Both in Sensitive and Resistant Pancreas Adenocarcinoma Cell Lines
[2] Effects of intravenous diltiazem in a rat model of experimental coronary thrombotic microembolism
